常用单克隆抗体偶联荧光染料 | 流式宇宙

常用流式荧光染料分类

流式细胞术能同时"看见"多少个抗原，取决于手里有多少支可用的荧光枪。

过去四十年，抗体的本质没怎么变，染料却换了好几代：从 FITC、PE 这些老面孔，到聚合物染料、DNA 骨架染料，一台仪器能分辨的通道数已经从 4 色做到了 40 色以上。

常用单克隆偶联荧光染料有这样几种，分类逻辑其实只有一句话：看它的发光核心是无机晶体、有机小分子、藻类蛋白、共轭聚合物，还是核酸骨架。

▍ 量子点（无机荧光纳米晶体）

量子点是半导体纳米晶体。它和绝大多数染料最大的不同在于：发射波长由晶体核心的物理尺寸决定，而不是由化学结构决定。

目前这类染料基本只剩一家在做： Thermo Fisher 的 Qdot 系列 （原 Molecular Probes），共 9 种，按发射波长命名——Qdot 525、545、565、585、605、625、655、705、800。吸收带很宽，300 nm 附近最强，405 nm 仍可高效激发，488 nm 效率明显下降；具体到某一核壳结构还有吸收截止边，不能简单理解为短于发射波长就能激发。核心尺寸与发射波长正相关：525 的核心约 2–3 nm，800 约 6–8 nm。

它的特点很突出：

激发宽： 量子点吸收带很宽，一支紫外或紫色激光可以同时点亮多种 QD，但多激光配置下也会带来交叉激发与补偿复杂度；

发射窄： 荧光信号集中，通道之间的补偿很小；

极稳定： 化学性质稳定，不易被各种酶降解，很少发生光漂白。

另外，颗粒大，抗体偶联后空间位阻明显，染胞内抗原或致密抗原时容易染不上；

表面化学复杂，对巨噬细胞和死细胞的非特异性结合要专门封闭；

对固定和破膜敏感。

Qdot 今天的位置很清楚：不是主力，而是在紫激光通道不够用、又需要极亮信号时补一两个位置，多是光谱流式和弱表达抗原。

代表品牌： Qdot（Thermo Fisher）——目前流式在售的量子点染料基本只剩这一家。 一抗偶联只有 5 个颜色——Qdot 565、605、655、705、800，靶点集中在人 CD2、CD3、CD4、CD8、CD10、CD14、CD19、CD20、CD27、CD38、CD45、CD45RA、CD56 和 HLA-DR。

▍ 有机小分子染料

这是流式细胞术用的第一批染料，也是今天用量最大的一类。最常见的母核是四类：

荧光素（fluorescein）： 代表是 FITC，分子量 389 Da，蓝光激发，520 nm 左右检测。共价结合，光子产量很高，是流式中最常用的荧光染料之一；

罗丹明类/硫罗丹明： 代表是 Texas Red（德克萨斯红），磺基罗丹明 101 的衍生物，分子量 625 Da，可被 561 或 594 nm 激光激发，发射 613–615 nm；

香豆素（coumarin）： 紫外与紫光区的经典母核；

青色素（cyanine）： 即 Cy 系列，详见下一节。

市面上多数有机小分子染料，都是这四类母核"衍生改造"出来的产物。

此外 BODIPY（氟硼二吡咯）、方酸菁、噁嗪等母核也常被使用，只是在抗体偶联里占比很小。它们的长处是激发曲线一致、批间稳定、偶联化学成熟、价格友好；短处是 Stokes 位移小、对环境敏感。

代表品牌： Alexa Fluor、DyLight、eFluor 单体（Thermo Fisher）、CF（Biotium）、iFluor（AAT Bioquest）、Spark 多数型号（BioLegend）、Cy（Cytiva）、Pacific Blue（Thermo Fisher）、VioBright 小分子（Miltenyi Biotec）等。

▍ 藻胆蛋白及相关串联染料

藻胆蛋白是从各种藻类中提取的大分子蛋白，和有机合成染料相比，荧光量子产率高、消光系数大，是天然的"亮度天花板"，但容易被光漂白。3 个主角：

PE（藻红蛋白）： 存在于红藻中、可进行光合作用的荧光蛋白，每个分子含 34 个藻红素发色团，分子量 240 kDa，最大吸收峰 564 nm，488 nm 或 532 nm 激光照射后高效激发，发射在 576 nm 附近；

PerCP（多甲藻叶绿素蛋白）： 在甲藻（如 Glenodinium）的光合系统中发现的蛋白复合物，脱辅基蛋白约 35 kDa（完整功能复合体更大），蓝光激发，最大发射 675 nm。它的光子产量并不高，更适合高表达抗原的检测；

APC（别藻青蛋白）： 在蓝藻（cyanobacteria）中发现的天然荧光色素，APC 为(αβ)₃六聚体，含多个共价结合的藻蓝胆素发色团，分子量约 105 kDa，红光激发，最大发射 660 nm。

串联染料（tandem） 是把两个荧光团共价连起来：前一个荧光团（供体）被激发后，把能量通过荧光共振能量转移交给后一个（受体小分子），由受体发光。于是"蓝光激发的 PE"可以"发出红光"。

常用供体是 PE 和 APC，有时也用 PerCP；

常见组合：PE-Cy5、PE-Cy5.5、PE-Cy7、PerCP-Cy5.5、APC-Cy5.5、APC-Cy7，以及 PE-AF647/AF680/AF750、APC-AF700/AF750 这类"蛋白 + 小分子"的杂合串联；

优点： 亮度高、有效 Stokes 位移大，一支 488 nm 激光就能覆盖到远红；

缺点： 批次间可变性和稳定性问题。受体脱落、供体光谱漂移，都会让同一管染料在不同批次间"变形"，必须避光保存、按批验证。

最近几年，串联染料开始用更新的分子做供体或受体，比如合成有机聚合物（eFluor 系列）。这类串联的供体吸收带宽、发射带长，可供配对的受体选择更多，不必再局限于 Cy 系列那几种——当然，供体发射与受体吸收的光谱重叠仍是能量转移的前提。

代表品牌： PE、PerCP、APC 本体各家通用；串联如 PE-Cy 系列、APC-Cy 系列（Cy，Cytiva）、Alexa Fluor 串联与 eFluor 串联（Thermo Fisher）、Fire 与 PE-Dazzle（BioLegend）、PE-Vio 与 APC-Vio（Miltenyi Biotec）等。

▍ 聚合物与纳米结构染料

这一大类有 三条技术路线 。

① 共轭聚合物 ——把成百上千个发光单元串在一条共轭主链上，形成一根"分子天线"：吸收一个光子，能量沿链传递，最后集中从一个出口发射。单个偶联物上挂着极多的发光单元，亮度远超小分子，而且发射峰窄、Stokes 位移大。代表是 BD 的 Brilliant 系列、Thermo 的 Super Bright 和 Cytek 的 cFluor。

② 聚合物纳米颗粒 ——把染料嵌进聚合物微球。代表是 Bio-Rad 的 StarBright。

③ 骨架排布 ——把荧光团按精确间距排在合成骨架上。代表是 Sony 的 KIRAVIA（柱状骨架）和下一节的 DNA 骨架。

聚合物染料是近十年多色 panel 扩容的主力，尤其是 405 nm 紫光通道。

BV 系列的多数早期聚合物对强固定/透化条件较敏感，做胞内染色时建议按具体 clone 和批次验证兼容性（优化后的 BV421 等已可用于胞内染色）。

代表品牌： Brilliant BUV/BV/BB（BD Biosciences）、Super Bright（Thermo Fisher）、StarBright（Bio-Rad，纳米颗粒路线）、KIRAVIA（Sony）、SuperNova（Beckman Coulter）、VioBright（Miltenyi Biotec）、cFluor 部分（Cytek）。

▍ DNA 骨架染料

最新的一代思路：用自组装的合成 DNA 寡核苷酸做"脚手架"，把荧光团精确固定在单链的固定位置上，形成稳定的 DNA 宏观结构。荧光团之间的距离被精确控制，可以放在最佳间距上，从而避免自淬灭、把亮度做上去。

Thermo Fisher 在 2020 年收购 Phitonex 后推出的 NovaFluor 就属于这一类，如 Blue 530/610/660、Yellow 570/610/660 等，包含不同亮度变体，目前共 33 种。

发射光谱窄，激发光谱重叠小；

同一"颜色"可以做出不同亮度版本，如 NovaFluor Blue 660/40S 与 NovaFluor Blue 660/120S，后缀数字即相对亮度；增加 Phiton 支架上的荧光团负载、或控制偶联到抗体上的标记数量，都能调节亮度；

与常规偶联染料相比，固定和染色后仍然稳定；

注意： 不能与核酸结合类染料（PI、7-AAD、DAPI、DyeCycle、SYTOX 等）同时使用——NovaFluor 以 DNA 支架承载荧光团，核酸染料的结合会干扰其光谱与亮度。

代表品牌： NovaFluor（Thermo Fisher，源自收购的 Phitonex）。

理想的流式荧光染料

✓ 易与被标记物结合，且不影响被标记物的特异性；

✓ 光子产量高，信号强；

✓ 发射光谱窄，荧光溢漏少，与其他染料发射光谱不重叠；

✓ 对激发光有较强吸收（摩尔消光系数大）；

✓ 激发光谱与发射光谱之间距离大；

✓ 尽量避免多激光激发——最好只被一支激光点亮；

✓ 稳定性好，不受光、温度、标本抗凝剂和固定剂的影响；

✓ 对 pH 不敏感；

✓ 分子量适中， 决定偶联比、空间位阻和胞内可达性， 偶联后不显著改变抗体的空间位阻与动力学。

现实中不存在全部满足的染料。PE 亮，但分子量大又怕光；BV 更亮，但对固定/透化敏感；FITC 便宜稳定，却对 pH 敏感、光谱又宽；量子点极耐漂白，但分子量大、表面化学复杂。所谓"选染料"，本质是在这些约束里做取舍。

光说"亮"没有意义，得能测。业内常用这几个指标：

亮度（brightness）： 由摩尔消光系数和荧光量子产率共同决定，二者对每一种染料都是特异的。厂家标注的"相对亮度/初始亮度"，就是这个乘积相对标准品的比值。同样标 1 个抗体分子，亮度差 10 倍，弱抗原就可能从"看不见"变成"看得清"；

Stokes 位移： 激发峰与发射峰之差，常见流式染料约 30–300 nm：蛋白类串联约 100 nm，聚合物串联可达 200 nm 以上。数值越大，越容易把激发光与信号分开，溢漏越小；

染色指数（Stain Index）： SI = (阳性群MFI − 阴性群MFI) / (2 × 阴性群SD)，适用于单峰近似分布，衡量分离度。它衡量的是"分离度"而不是单纯亮度——如果背景高、CV 大，再亮的染料 SI 也上不去。排 panel 时，它比亮度更值得参考；

荧光溢漏（spillover）： 该染料在所有非主检测通道中的信号泄漏总和，是补偿矩阵的基础。 扩散误差（spread error）： 溢漏经补偿后带来的 CV 放大，才是真正影响 panel 难度的指标。两者需区分看待；

稳定性： 包括光稳定性（连续照明 30 秒后的残余荧光百分比）、抗淬灭剂中的光稳定性、缓冲液兼容性、pH 稳定性和批间一致性。串联染料和蛋白类染料在这几项上天然吃亏。

主要厂商与荧光染料

主要厂商与染料品牌一览

注：商标的™与®标记从略。

▍ Thermo Fisher

Alexa Fluor： 名字来自 Molecular Probes 创始人之一 Dick Haugland 的儿子 Alex。做法是在香豆素、荧光素、罗丹明、青色素等母核上引入磺酸酯基团，带来一系列好处：信号强，适合弱表达抗原；光稳定性强，不易漂白；在较宽 pH 范围内稳定；水溶性好，不用有机溶剂就能直接结合蛋白，长期储存也不易产生沉淀。目前在售共 28 种（含 8 个 Alexa Fluor Plus），光谱从 350 nm 一直铺到 800 nm：

蓝紫段：AF350、AF405、AF Plus 405

绿黄段：AF430、AF488、AF Plus 488、AF514、AF532

橙段：AF546、AF555、AF Plus 555、AF561

红段：AF568、AF594、AF Plus 594

远红段：AF610、AF633、AF635、AF647、AF Plus 647

近红外段：AF660、AF680、AF Plus 680、AF700、AF750、AF Plus 750、AF790、AF Plus 800

流式上真正高频使用的其实只有十来个：紫光 AF405、蓝光 AF488、红光 AF647，以及近红外的 AF700 与 AF750。此外，它还是串联染料最常用的受体之一——PE-AF610、PE-AF647、PE-AF700、PE-AF750 与 APC-AF700、APC-AF750，都是 Thermo 自家的现成组合。

Alexa Fluor® （AF）

Alexa Fluor Plus： 在传统 Alexa Fluor 基础上做的化学优化版本，主打更高信噪比和更低交叉反应，用来检测低丰度靶标；覆盖 405、488、555、594、647、680、750、800 八个波段，可与原系列按波段一一对应替换。

DyLight ： 与 Dyomics 合作开发，同样通过磺酸酯化把染料做成带负电、亲水的小分子。优点是荧光强、光稳定性好、pH 4–9 范围内不敏感、分子小渗透性好，水溶性好到能用很高的染料/蛋白比标记而不沉淀；消光系数从 1.5 万（DyLight 350）到 27 万（DyLight 800），这是它亮度的底气。目前共 10 种染料，覆盖 350–800 nm：350、405（紫）、488（青绿）、550、594（橙黄）、633、650（红）、680、755、800（近红外）。偶联上，NHS 酯接赖氨酸、马来酰亚胺接半胱氨酸。

DyLight ：

与 Dyomics 合作开发，同样通过磺酸酯化把染料做成带负电、亲水的小分子。优点是荧光强、光稳定性好、pH 4–9 范围内不敏感、分子小渗透性好，水溶性好到能用很高的染料/蛋白比标记而不沉淀；消光系数从 1.5 万（DyLight 350）到 27 万（DyLight 800），这是它亮度的底气。目前共 10 种染料，覆盖 350–800 nm：350、405（紫）、488（青绿）、550、594（橙黄）、633、650（红）、680、755、800（近红外）。偶联上，NHS 酯接赖氨酸、马来酰亚胺接半胱氨酸。

eFluor： 小分子路线（eBioscience 的经典系列），按发射波长命名。流式常用的共 7 种——4 个单体加 3 个串联：紫激光 eFluor 450（405/445）、eFluor 506（419/508）；561 激光 eFluor 570（556/569）；蓝激光 PerCP-eFluor 710（482/708）；黄绿激光 PE-eFluor 610（565/606）；红激光 eFluor 660（651/668）、APC-eFluor 780（780 nm 发射）。

Super Bright： eBioscience 的聚合物染料，405 nm 紫激光激发（激发峰约 414 nm），按发射波长命名。共 5 种：436（414/436）是聚合物本体，官方称比 eFluor 450 和 Pacific Blue 明显更亮；600、645、702、780 是串联聚合物，发射峰分别为 601、645、702、780 nm。通道上分别对应 BV421、BV605、BV650、BV711、BV786，卖点是阴阳性分群更清楚、背景和染料间干扰更低。

NovaFluor： DNA 骨架路线（源自 Phitonex），荧光团按固定间距挂在 DNA 支架上、间距可控，所以同一颜色能做成不同亮度的版本——Blue 610 分 /30S 与 /70S，Blue 660 分 /40S 与 /120S。 激发谱窄、跨激光激发少是它最实用的一点：常规染料挤不进去的通道，它能填。目前共 33 种，按激光分：紫外 1 个（UV 765）、紫光 3 个（Violet 690/745/800）、蓝光 13 个（Blue 510/530/555/585/610-30S/610-70S/660-40S/660-120S/690/725/745/760/800）、黄绿 9 个（Yellow 570/590/610/660/690/700/730/755/810）、红光 7 个（Red 660/685/700/710/725/755/800）。

NovaFluor：

DNA 骨架路线（源自 Phitonex），荧光团按固定间距挂在 DNA 支架上、间距可控，所以同一颜色能做成不同亮度的版本——Blue 610 分 /30S 与 /70S，Blue 660 分 /40S 与 /120S。

激发谱窄、跨激光激发少是它最实用的一点：常规染料挤不进去的通道，它能填。目前共 33 种，按激光分：紫外 1 个（UV 765）、紫光 3 个（Violet 690/745/800）、蓝光 13 个（Blue 510/530/555/585/610-30S/610-70S/660-40S/660-120S/690/725/745/760/800）、黄绿 9 个（Yellow 570/590/610/660/690/700/730/755/810）、红光 7 个（Red 660/685/700/710/725/755/800）。

▍ BD Biosciences

Brilliant Ultraviolet（BUV）： 共 7 种，355 nm 紫外激光激发——BUV395（348/395）、BUV496（350/496）、BUV563（350/564）、BUV615（350/615）、BUV661（350/660）、BUV737（350/735）、BUV805（351/803）。除 BUV395 与 BUV805 是聚合物本体，中间五个都是以 BUV395 为供体的聚合物串联，因此还分别能被 405、488、561、628–640 nm 交叉激发。一支紫外激光能开出 7 个通道，仅次于紫光的 9 个。

Brilliant Violet（BV）： 共 9 种，405 nm 紫光激发——BV421（407/423）、BV480（440/479）、BV510（405/512，327 nm 有次峰）、BV570（407/573）、BV605（407/605）、BV650（406/649）、BV711（407/713）、BV750（409/754）、BV786（407/786）。BV421、BV480、BV510 是聚合物本体，BV570 往上都是以 BV421 为供体的串联。BV421 是紫光通道的事实标准，亮度高、光谱窄，几乎每个 panel 都绕不开它。

Brilliant Blue（BB）： 共 6 种，488 nm 蓝光激发——BB515（490/515）、BB630-P2（476/614）、BB660-P2（476/660）、BB700（476/695）、BB755-P（478/755）、BB790-P（484/790）。BB515 是聚合物荧光素（BD 官方口径为 polymer fluorochrome，与 BV/BUV 的 Sirigen 平台是什么关系未披露），用来替代 FITC；其余五个是以专有聚合物为供体的串联，在 PE-CF594、PE-Cy5、PerCP-Cy5.5、PE-Cy7 直到 790 nm 的位置上替代传统串联，卖点是批间更稳、交叉激发更小。带 "-P" 后缀的是原型（prototype）染料，尚未全部常备现货。

BD Horizon Real 系列（RV / RB / RY / RR）： 在 Brilliant 之外另起的一套"激光专用"染料，近几年陆续上市，分子量都在 45 kDa 以下、技术上不基于 Sirigen 聚合物——这两条都是 BD 官方 FAQ 的原话（"all less than 45 kDa""separate from Sirigen polymer technology"）。设计目标只有一个——把传统串联最大的毛病（同一管染料被多支激光同时点亮）压下去。所以它按激光分家，而且 RB 与 RY 成对：同一个发射位置各做一个，panel 里缺哪支激光就换另一个，不必重排。四个子系列共 17 种：

RealViolet（RV）： 2 种，412 nm 激发——RV544（412/544）、RV828（412/828）。RV544 要替的是 Spark V538、StarBright Violet 535、Pacific Orange、Krome Orange 那一排；RV828 覆盖紫激光的 780–800 nm 近红外区，BD 官方将其列为 Qdot 800、NovaFluor V800 的替代位。

RealBlue（RB）： 8 种，488 nm 蓝光激发——RB545（496/545）、RB575（508/574）、RB613（492/613）、RB670（492/670）、RB705（498/707）、RB744（498/746）、RB780（498/781）、RB824（492/824）。从 545 到 824 把蓝激光的橙红到远红段铺满，逐一对应 PE（RB575）、PE-CF594（RB613）、PE-Cy5（RB670）、PerCP-Cy5.5（RB705）、PE-Cy7（RB780）、PerCP/Fire 806（RB824）。

RealYellow（RY）： 6 种，561 nm 黄绿激光激发——RY586（565/586）、RY610（557/610）、RY655（557/654）、RY703（557/703）、RY743（557/743）、RY775（557/775）。

RealRed（RR）： 目前只有 1 种，640 nm 红光激发——RR688（669/688），用来替代 Alexa Fluor 660、Spark NIR 685、NovaFluor R685、cFluor R685。

此外还有几个"单支"染料：V450（405/450）与 V500（415/500）是 BD Horizon 系列的小分子紫光染料，不是聚合物；黄绿段有 PE-CF594（566/615）；红光段有 APC-R700（651/706）、APC-H7（659/782）、Red 718（695/718）。这几个都是传统小分子或串联，光谱位置经典、抗体覆盖广，至今仍是很多固定 panel 的默认选项。

▍ BioLegend

Spark： 小型合成染料，是 BioLegend 用来"填缝"的主力。分两条线——Spark 本体 12 种、Spark PLUS 9 种（同色号的高亮版本，用专有技术把简单小分子的信号提上去），合计 21 种，按激光排开。紫外：Spark UV 387（351/387）、Spark Plus UV395（355/385）；紫光：Spark Violet 423（400/423）、Spark Violet 500（393/500）、Spark Violet 538（399/538）、Spark Plus V450（405/452）、Spark Plus V475（404/475）、Spark Plus V510（400/500）、Spark Plus V538（394/552）；蓝光：Spark Blue 515（506/515）、Spark Blue 550（516/540）、Spark Blue 574（506/574）、Spark Plus B488（495/519）、Spark Plus B550（516/540）、Spark Plus B574（506/574）；黄绿：Spark YG 570（555/570）、Spark YG 581（565/581）、Spark YG 593（565/593）、Spark Plus YG581（565/581）；红光：Spark NIR 685（660/685）、Spark Red 718（697/711）。卖点是发射谱窄、稳定、水溶性好；更实用的一条是——它是小分子合成染料，对固定和醇类透化不敏感，做磷酸化流式比蛋白类染料省心。多数型号是为光谱流式设计的，常规仪器上要自己配滤光片。

Fire： 蛋白供体加专有受体的串联，定位很明确——替掉用了二十年的那批老串联。共 8 种：PE/Fire 640（565/639）、700（565/695）、744（565/744）、810（565/806）；PerCP/Fire 780（488/774）、806（488/806）；APC/Fire 750（650/774）、810（650/807）。主要替代 PE-Cy5 至 APC-H7 这一段老串联，对单核细胞的非特异结合低。

Dazzle： 只有一支——PE/Dazzle 594（565/610），填在 PE 与 PE-Cy5 之间那段空档。

Zombie： 胺反应型死活染料，共 11 色：UV（360/459）、Violet（400/423）、Aqua（382/516）、Yellow（396/572）、Green（490/515）、B550（488/540）、YG581（561/581）、Red（600/624）、R685（633/685）、R718（633/718）、NIR（719/746）。和 PI、7-AAD 最大的区别是它共价结合蛋白的伯氨基，固定、破膜之后死活格局不变——所以可以染在固定之前，后面照常做胞内。除这 11 支，家系里还有 Tag-It Violet 这类不做抗体偶联的标记用染料。

▍ 其余厂商速览

Biotium CF： 共 42 种，是独立染料厂商里覆盖最全的系列之一。 技术路线是以磺化罗丹明和花菁为核心，通过特殊化学修饰把染料的分子内转动"锁住"，从而拿到高量子产率、高水溶性和几乎不挑 pH 的稳定性，近红外段（CF680–CF870）尤其有竞争力。按激光分组：紫外（355 nm）——CF350（347/448）；紫光（405 nm）——CF405S（404/431）、CF405M（408/452）、CF405L（395/545）、CF410（416/455）、CF430（426/497）、CF440（440/512）、CF450（450/533）；蓝光（488 nm）——CF488A（490/515）、CF505（505/519）、CF503R（503/532）、CF510（513/537）、CF514（516/549）；黄绿（561 nm）——CF532（527/552）、CF543（541/563）、CF550R（551/577）、CF555（555/565）、CF568（562/583）、CF570（568/592）、CF583（583/606）、CF583R（585/609）、CF594（593/614）、CF597R（597/619）；红光（640 nm）——CF620R（617/643）、CF633（630/650）、CF640R（642/662）、CF647（650/665）、CF660C（667/685）、CF660R（663/682）、CF680（681/698）、CF680R（680/701）、CF700（696/721）、CF710（712/735）、CF725（729/750）、CF740（742/767）、CF750（755/779）、CF770（770/797）、CF790（784/808）、CF800（797/817）、CF820（822/835）、CF850（852/870）、CF870（877/896）。 CF 还有一个特殊身份：它就是 Cytek cFluor 背后的主要贴牌来源。

Cytek Biosciences

cFluor 是 Cytek 为自家全光谱流式细胞仪（Aurora、Northern Lights）配套开发的试剂系列，命名规则一目了然：cFluor + 激发光首字母 + 最大发射峰值，如 cFluor R720 就是红激光激发、发射 720 nm；能同时被两支激光有效激发的标双字母，BYG 表示蓝光和黄绿光都行。化学类型比较杂：小分子合成染料占多数，也有蛋白染料（B675、BYG575、R659 分别近似 PerCP、PE、APC 的位置）、串联染料（B690、BYG 系列、R745），甚至还有纳米颗粒（UV395）。值得注意的是，Cytek 是做仪器起家的公司，cFluor 中相当一部分染料并非自研，而是合作贴牌或收购所得。

紫外（UV，355 nm）：8 种——UV395、UV440、UV515、UV570、UV610、UV670、UV745、UV790。紫光（V，405 nm）：14 种——V420、V435、V450、V475、V505、V515、V547、V570、V605、V610、V670、V715、V755、V780。V450 对标 Pacific Blue，V547 对标 Pacific Orange，V610 与 BV605 位置相近又能拉开，是光谱流式专属的"加座"。

蓝光（B，488 nm）：6 种——B515、B520、B532、B548、B675、B690。B520 是 FITC 位；B515、B532、B548 三个窄峰小分子挤在 515–548 nm，只有全光谱仪器能把它们拆开用；B675、B690 补 PerCP 和 PerCP-Cy5.5 的位置。

黄绿（YG，561 nm）：10 种——YG584、YG600、YG610，以及双激发的 BYG575、BYG610、BYG645、BYG667、BYG710、BYG750、BYG781。YG584 是站在 PE 位置上的小分子，YG610 对标 PE-Dazzle 594；BYG610 同在 610 nm，官方定位就是 PE-Dazzle 594 的加亮版；BYG710 对标 PE-Alexa Fluor 700，BYG781 对标 PE-Cy7，BYG750 是光谱上独一份的位置。

红光（R，640 nm）：在册 6 种——R659、R668、R685、R720、R780、R840（R745 为 APC 串联，目录仍有售，未入最新速查表）。R659 是蛋白染料，站 APC 位；R668 对标 Alexa Fluor 647，R685 对标 APC-Cy5.5，R720 对标 Alexa Fluor 700，R780、R840 一路补到 780 和 810 nm。另有胺反应型死活染料 ViaDye Violet（375/600）、ViaDye Red（615/740），以及收购 Tonbo 得来的 violetFluor 450（405/450）、violetFluor 500（410/500）、redFluor 710（684/704）。

把官方文档脚注拼起来，cFluor 的出身基本透明——UV395 就是 Bio-Rad 的 StarBright UV400（官网明示由 Bio-Rad 生产供应）；V547、B515、B548、R668、R685、R720 分别对应 Biotium 的 CF 405L、CF 488A、CF 514、CF 647、CF 660C、CF 700；R840 和 BYG610 是 BioLegend 的 APC/Fire 810 与 PE-Dazzle 594；ViaDye 死活染料即 Biotium 的 Live-or-Dye；2021 年 11 月 Cytek 又收购了 Tonbo Biosciences 的细胞分析业务，violetFluor、redFluor、Ghost Dye 系列就此并入。一家仪器公司靠"合作+收购"快速补齐试剂版图，Cytek 是最典型的样本。

目前在册 44 种（另有 R745 仍在售），加上两支 ViaDye 死活染料和收购 Tonbo 得来的三支，Cytek 体系下的荧光选择已覆盖 355–810 nm。

Bio-Rad StarBright： 荧光纳米颗粒路线的代表——把染料嵌进聚合物纳米微球，不是传统串联、没有串联断裂问题，亮度高、激发和发射谱窄、耐 PFA 和醇类固定、可以预混后在 4 ℃ 存放半年，也不挑染色缓冲液。共 36 种，按五支激光排开——紫外（355 nm）11 种（UV400–UV795）、紫光（405 nm）10 种（V440–V790）、蓝光（488 nm）6 种（B580–B810）、黄绿（561 nm）5 种（Y575–Y800）、红光（640 nm）4 种（R670–R815）；其中 SBUV540、SBUV700、SBUV770、SBV535 四种专为光谱流式开发，在 Aurora、ID7000 这类全光谱仪上有专属通道。亮度是它的招牌：SBB580 比 Alexa Fluor 532 亮十倍以上，SBUV400 是 BUV395 的两倍。顺带一提，Cytek 的 cFluor UV395 就是 Bio-Rad 代工的 StarBright UV400。

Sony KIRAVIA： 有机聚合物专利染料，把荧光分子精确排布在 Sony 自研的柱状骨架上，亮度高、不挑缓冲液，常规和光谱流式都能用。目前家族只有一支——KIRAVIA Blue 520（497/520），488 nm 激发、520 nm 发射，比 Alexa Fluor 488 更亮更稳，可平替 FITC 通道。

Beckman Coulter SuperNova： 紫光激发的聚合物染料，全部衍生自核心染料 v428——SuperNova v428（414/428）是 405 nm 可激发染料里最亮的之一，专打低表达标志物；v605（414/605）、v650（414/646）、v786（414/786）为聚合物串联，分别落在 610/20、660/10、780/60 滤光片的位置。

Cytiva / GE 的 Cy 系列： Cy3、Cy5、Cy7 等经典系列。注：Cy 染料结构基于 indolenine 发色团，与 ICG（吲哚菁绿）无直接衍生关系——ICG 为三碳菁，Cy 系列为对称花青素衍生物，都有两个对称的 indolenine 发色团，非特异性吸附少、消光系数高、量子产率高，标记后背景弱、信号强。其中 Cy3、Cy5、Cy7 的发色团是 indolenine，Cy3.5、Cy5.5、Cy7.5 是 benzoindole——仅仅多了一个苯环，却让吸收峰和发射峰整体红移，于是 Cy 系列可以覆盖从紫外到远红外的几乎全部常用谱带。结构上为了便于标记，会在一端的发色团上引出一个带羧基的六碳链来活化。

AAT Bioquest： 主打 iFluor（27 种）和 mFluor（31 种，其中 3 种为 SE 活化酯版本）两大系列。iFluor 的定位是 Alexa Fluor / DyLight 的高性价比平替，光谱逐一对应、亮度不落下风。按激光分组：紫外——iFluor 350（344/448）；紫光——iFluor 405（402/425）、430（433/495）、450（451/502）；蓝光——iFluor 488（491/516）、514（527/554）；黄绿——iFluor 532（543/563）、546（541/557）、555（556/569）、560（559/571）、568（568/587）、594（587/603）、610（609/627）；红光——iFluor 633（638/652）、647（654/669）、660（660/677）、670（669/682）、680（683/700）、700（690/713）、710（712/736）、750（756/777）、790（786/811）、800（801/820）、810（811/822）、820（820/849）、840（836/876）、860（852/877）。 mFluor 最初是为成像流式细胞仪（Amnis ImageStream）设计的染料系列，现在也提供常规流式用的抗体偶联物，同样按五支激光铺开：紫外——UV375（351/387）、UV420（353/421）、UV460（362/456）、UV455（357/461）、UV520（367/524）、UV540（368/560）、UV610（369/609）；紫光——Violet 450（406/445）、Violet 480（404/475）、Violet 500（410/501）、Violet 505（393/504）、Violet 510（409/504）、Violet 540（400/532）、Violet 545（393/543）、Violet 550（420/550）、Violet 590（423/591）、Violet 610（421/612）；蓝光——Blue 570（505/564）、Blue 580（485/580）、Blue 590（499/589）、Blue 620（499/616）、Blue 630（470/632）、Blue 660（481/663）；黄绿——Green 620（521/617）、Yellow 630（570/632）、Green 630（537/657）；红光——Red 700（657/694）、Red 780（631/768）。要留意 mFluor 的命名：前缀指适用的激光线族、数字指发射峰位，个别染料吸收带很宽，激发峰与激光线并不严格对齐——如 Blue 系列均可被 488 nm 有效激发，但激发峰已移到 470–505 nm。

Miltenyi Biotec： Vio 系列是 MACSQuant 系列仪器的配套染料，单体、串联、大斯托克斯位移染料齐全（不含 PE、APC 等常规蛋白染料共 15 种）：紫光（405 nm）——VioBright V423（399/420）、VioBlue（400/452）、VioGreen（388/520，大斯托克斯位移）、VioBright V600（400/603）、V646（398/645）、V710（398/714）、V787（398/781）；蓝光（488 nm）——VioBright B515（488/514）、VioBright FITC（496/522，加量 FITC）、PerCP-Vio 700（482/704）；黄绿（561 nm）——PE-Vio 615（565/619）、PE-Vio 770（565/775）；红光（640 nm）——VioBright R667（645/668，APC 位的小分子替代）、VioBright R720（695/720）、APC-Vio 770（652/775）。

其余小众品牌： Tocris Janelia Fluor、Biostatus DRAQ5/DRAQ7、LI-COR IRDye、Merck ColorWheel：各自在细分场景（神经科学示踪、活细胞核染、近红外、成像）里占位。

先定激光，再定染料。 405 / 488 / 640 三激光是今天的标配，紫外（355）决定你能不能用 BUV 系列，561 决定你能不能上 PE 的高效激发。染料的选择空间，本质上是被激光器和滤光片配置框死的。

用抗原密度倒推亮度。 高表达标志物可以"将就"，低表达抗原必须"富养"。一个常见的浪费是：把高亮度染料配给了 CD45，却在测细胞因子时用了 PerCP。

把"稳定性"当成选型指标，而不是售后问题。 串联染料看批间一致性，聚合物染料看固定/透化兼容性，蛋白类染料看光漂白与缓冲液要求。多色 panel 里最贵的成本，从来不是试剂单价，而是重复实验。

避坑提示： 串联染料怕光、聚合物染料怕强透化、蛋白染料怕反复冻融。下单前先看 datasheet 里的"Compatible with：intracellular staining / fixation"字段，别等抗体偶联完才发现不能用。

说明：文中染料数量（如 Alexa Fluor 28 种、DyLight 10 种、cFluor 44 种、ViaDye 2 种、StarBright 36 种、CF 42 种、iFluor 27 种、mFluor 31 种、KIRAVIA 1 种、SuperNova 4 种、Vio 系列 15 种、Northern Lights 3 种、NovaFluor 33 种、Super Bright 5 种、eFluor 7 种、BUV 7 种、BV 9 种、BB 6 种、Real 系列（RV/RB/RY/RR）17 种、Spark 21 种、Fire 8 种、Dazzle 1 种、Zombie 11 种）为资料整理时的统计，具体型号与数量请以各厂家最新目录为准；不同仪器配置下的可用通道也会有差异。