Thermo Fisher+启衡星+捷瑞生物+GeneCreate方法学肿瘤传染病
荧光定量PCR引物与探针设计全参数 — TaqMan/MGB/分子信标/Tm/GC/二聚体/发夹
发布日期：未知
文档来源：Thermo Fisher+启衡星+捷瑞生物+GeneCreate
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概述
荧光定量PCR引物与探针设计参数速查: 一、引物设计核心:长度17~25bp(理想17~22bp)。Tm值58~62℃(理想61~62℃)/两引物差异≤2~5℃。GC含量40~60%。3端5个碱基中G/C不超过2~3个。3端避免A(错配率最高)。扩增产物100~200bp(理想100~150bp/越短扩增效率越高)。 二、避免二聚体与发夹:引物自身不能有连续≥4bp互补。发夹茎部≤2~3bp(G/C)或3~5bp(A/T)。发夹能值>4.5kcal/mol→降低有效引物浓度。两条引物间不能有连续≥4bp互补/尤其3端互补致命(2~3bp也需警惕)。设计后用Primer-BLAST/Oligo7...