Thermo+IDT+KAPA+NMPA方法学通用
多重PCR体系优化 — 引物互作/竞争抑制/荧光通道选择/引物浓度平衡全流程
发布日期：未知
文档来源：Thermo+IDT+KAPA+NMPA
原文件：未上传
概述
多重PCR(Multiplex)体系优化全维度: 一、引物设计(最核心):引物长度22~28bp(比单重PCR长3~5bp)→提高特异性。Tm值要求:所有引物Tm 58~62℃(ΔTm≤2℃)→同一退火温度同时有效工作。引物浓度平衡:设计20重反应→每重引物浓度需单独优化(从0.05μM起以0.05μM增量滴定)→弱扩增目标加大引物(0.2~0.4μM)/强扩增目标降低引物(0.05~0.1μM)。引物互作检测:所有引物输入Primer-BLAST多序列比对→排除3'端互补>4bp→无交叉二聚体。 二、探针设计与荧光通道:多色探针(TaqMan探针):FAM(520nm)/HEX(556nm)...