Bio-Rad技术手册+翌圣生物+行业指南方法学传染病肿瘤
qPCR扩增效率与标准曲线质量控制 — 斜率-3.3理论值/抑制物排查/ROX参比染料/完整质控清单
发布日期：未知
文档来源：Bio-Rad技术手册+翌圣生物+行业指南
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概述
qPCR扩增效率与质控全参数: 一、标准曲线核心关系:理想斜率-3.32(100%效率)。扩增效率(%)=[10^(-1/斜率)-1]×100%。可接受范围:效率90~110%→斜率-3.6到-3.1/R²≥0.99。 二、抑制物排查:来源:模板提取残留(乙醇/酚/盐/EDTA/SDS)/生物样本(血红素/腐殖酸/多糖/尿素)/环境(手套粉末/塑料析出物)。表现:Ct偏大>30/效率偏低/扩增曲线异常/复孔差。解决方案:1.梯度稀释模板稀释抑制物。2.重新纯化。3.加BSA 0.4~4.4mg/mL结合抑制物。4.提高退火温度克服RNA二级结构。 三、ROX参比染料:被动参比(不参与反应/提供...