qPCR Ct值判读与阈值设定标准 — 基线/阈值线/内参/Cut-off/灰区判定全流程

qPCR Ct值判读六大核心参数: 一、基线与阈值线(BaseLine & Threshold):Baseline:前3~15个循环(无荧光增长期)取平均值→无模板对照NTC应在此范围内。Threshold:通常设定为基线荧光信号标准偏差×10(LinRegPCR或标准品确认)。阈值线必须在指数扩增区域内(Efficiency>90%)。 二、Ct值(Cycle Threshold):荧光信号超过阈值线所需的最小循环数。Ct值与模板量关系:标准品10倍稀释→ΔCt=3.32(E=100%时)。Efficiency(效率):用标准曲线E=10^(-1/slope)-1→90%~110%为可接受范...