化学发光HOOK效应 — CLIA夹心法高剂量Hook识别/阈值确定/稀释线性验证完整方案

化学发光夹心法HOOK效应全流程: 一、CLIA比ELISA/胶体金更易出现HOOK的原因:1)CLIA信号放大级数高,单个标记分子可产生多个光子,即使少量夹心复合物也可给出高信号,掩盖HOOK下降。2)一步法:全自动CLIA多为一步法(样本+标记抗体+磁珠抗体同时混合),无中间洗涤,HOOK风险最大。3)高抗体浓度高标记比:为追求宽线性范围,CLIA标记抗体浓度高(过饱和),延后但不会消除HOOK。 二、HOOK阈值确定实验:用超高浓度标准品(目标浓度x100~10000倍),自线性范围上限起,以10倍梯度稀释共10~15个浓度水平,每个浓度双孔测定,绘制完整钩状曲线。判定:信号值开始从峰值...