胶体金标记效率测定 — UV-Vis法/BCA法/活性回收率计算/离心上清法

胶体金标记效率测定四种方法: 一、UV-Vis分光光度法(最简便):分别测定金标抗体溶液OD₅₂₀(金特征峰)→离心后上清OD₅₂₀→OD₅₂₈(蛋白特征峰)。标记率(%)=(标记前OD₅₂₀−离心上清OD₅₂₀)/标记前OD₅₂₀×100%。蛋白结合量:标记前蛋白总量−离心上清蛋白量(BCA法定量)。理想标记率>85%。 二、BCA蛋白定量法(标记量确认):分别测标记前抗体总量→离心后上清游离抗体量→差值=结合到金上的抗体量。标记量(μg抗体/mg金)=结合抗体量/金质量。典型值:10~20μg抗体/mg金(夹心法)/1~5μg抗体/mg金(竞争法)。 三、活性回收率(最重要):标记后抗体活...